【cck8实验原理】CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种广泛应用于细胞活性检测的试剂，常用于评估细胞增殖、毒性、药物筛选等实验。其核心原理是基于WST-8（2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt）在细胞线粒体脱氢酶的作用下被还原为水溶性的橙黄色甲臜（Formazan），生成的甲臜量与活细胞数量成正比。通过测定特定波长下的吸光度值，可以间接反映细胞的存活率和增殖能力。
CCK8实验原理总结
| 项目 | 内容 |
| 名称 | CCK-8实验 |
| 原理 | WST-8在细胞线粒体脱氢酶作用下被还原为甲臜，其生成量与活细胞数成正比 |
| 检测方法 | 酶标仪测定450nm波长下的吸光度（OD值） |
| 适用范围 | 细胞增殖、细胞毒性、药物筛选等 |
| 优点 | 操作简便、灵敏度高、重复性好 |
| 缺点 | 对于贴壁细胞可能需要消化处理，影响结果准确性 |
| 常用仪器 | 酶标仪、分光光度计 |
| 主要试剂 | CCK-8试剂、细胞培养基、无血清培养基 |
实验流程简述
1. 细胞接种：将适量细胞悬液接种到96孔板中，置于恒温培养箱中培养。
2. 药物处理：根据实验设计加入不同浓度的药物或刺激物。
3. 加入CCK-8试剂：在培养结束后，向各孔中加入适量CCK-8试剂。
4. 孵育：继续培养一定时间（通常1-4小时），使WST-8充分反应。
5. 测定吸光度：使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度值。
6. 数据分析：根据OD值计算细胞存活率或增殖率。
注意事项
- 实验过程中应避免光照，防止WST-8分解。
- 不同细胞类型对CCK-8的反应可能存在差异，需进行预实验优化。
- 培养时间、细胞密度等因素均会影响实验结果，需保持一致。
CCK-8实验因其操作简便、结果稳定，已成为细胞生物学研究中的重要工具之一。在实际应用中，结合其他检测方法（如MTT法、LDH释放法等），可进一步提高实验的准确性和可靠性。
