免疫印迹法（Western Blot）是一种用于检测特定蛋白质在样品中存在的技术。这项技术结合了凝胶电泳分离蛋白质、转膜和特异性抗体检测的方法，从而实现对目标蛋白的精准定位与定量分析。
首先，样品中的蛋白质通过SDS-PAGE凝胶电泳按分子量大小进行分离。这种电泳过程利用带负电荷的SDS处理蛋白质，使不同蛋白质带上相同的电荷密度，并根据其分子量差异形成条带分布。随后，将分离后的蛋白质转移到固相载体上，如硝酸纤维素膜或PVDF膜，这一步称为“转膜”。转膜的目的在于将蛋白质从凝胶中释放并固定到膜表面，以便后续操作。
接下来是封闭步骤，使用非特异性结合位点封闭剂（通常是脱脂奶粉或BSA）填充膜上的空隙，防止抗体非特异性吸附。之后加入一抗孵育，该抗体能够与目标蛋白特异性结合。为了可视化目标蛋白的位置，再加入二抗孵育，二抗通常标记有酶（如HRP）或荧光染料，可与一抗发生反应。
最后，通过化学发光、显色反应或荧光扫描等手段检测目标蛋白的位置和相对含量。免疫印迹法因其高灵敏度和特异性，在生物医学研究中被广泛应用于蛋白质表达水平的研究、疾病标志物筛选以及药物作用机制探讨等领域。
总之，免疫印迹法通过一系列严谨的操作步骤实现了对复杂样本中目标蛋白的高效检测，为科学研究提供了重要工具。
